一、PCR實驗室布局

PCR實驗室原(yuan)則上為試(shi)劑準備(bei)區、樣品制備區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)、擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)和(he)擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)產(chan)物分(fen)析(xi)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)四個單獨的(de)工(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)域(yu)(yu)并設(she)有專(zhuan)用(yong)走廊，各工(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)域(yu)(yu)應(ying)設(she)緩沖間，工(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)與緩沖間宜(yi)安(an)裝連(lian)鎖裝置。不(bu)同功能(neng)的(de)工(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)應(ying)是(shi)分(fen)隔獨立的(de)，各工(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)有明顯的(de)標(biao)志，不(bu)能(neng)直通，如果緊密相連(lian)，需安(an)裝物品傳遞窗。前兩(liang)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)為擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)前區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)，后兩(liang)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)為擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)后區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)，擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)前區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)與擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)后區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)應(ying)嚴(yan)格(ge)分(fen)開。實(shi)驗材料、試劑(ji)、記錄紙、筆、清潔(jie)材料等，只能(neng)從擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)前區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)流(liu)向擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)后區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)，即從試劑(ji)準備區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)→樣品制備區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)→擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)→擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)產(chan)物分(fen)析(xi)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)，不(bu)得逆(ni)向流(liu)動(dong)。實(shi)驗室的(de)氣流(liu)也應(ying)從擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)前區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)流(liu)向擴(kuo)(kuo)(kuo)增(zeng)(zeng)(zeng)(zeng)后區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)，不(bu)得逆(ni)向流(liu)動(dong)。各工(gong)作(zuo)區(qu)(qu)(qu)(qu)(qu)頂部應(ying)安(an)裝紫(zi)外燈(deng)，紫(zi)外燈(deng)的(de)波長(chang)為254nm，每20㎡一支40W的(de)紫(zi)外燈(deng)。

實驗室各區功能及主要設備

1、試劑(ji)(ji)準(zhun)備區：主要進行(xing)試劑(ji)(ji)的(de)制(zhi)(zhi)備、分裝和(he)主反應混合(he)液的(de)制(zhi)(zhi)備。試劑(ji)(ji)和(he)用(yong)于樣品制(zhi)(zhi)作的(de)材料(liao)(liao)應直接運(yun)送至該區，不得經過其它區域。試劑(ji)(ji)原材料(liao)(liao)必(bi)須貯存在(zai)本區內，并在(zai)本區內制(zhi)(zhi)備成所(suo)需的(de)試劑(ji)(ji)。本區主要設(she)備有(you)天平(ping)、冰箱、離心(xin)機、加樣器(qi)、振蕩(dang)器(qi)等。

對于(yu)氣(qi)流(liu)壓力的控制，本區并(bing)沒有嚴格的要求。

2、樣品(pin)制(zhi)備區：主(zhu)要進行樣品(pin)的保存(cun)、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增(zeng)反應管和測(ce)定DNA的合成。本區(qu)主(zhu)要設(she)備(bei)有(you)冰箱、生(sheng)物安全柜、離心機、加樣器、振(zhen)蕩器、恒溫水浴等。

本區的壓力梯度(du)要求為：相對于(yu)鄰近區域為正(zheng)壓，以(yi)避(bi)免從鄰近區進入本區的氣溶(rong)膠污(wu)染(ran)。

3、擴增區：主(zhu)要(yao)進(jin)行DNA擴(kuo)增。此外，已制備的DNA模板 (來自樣品制備區(qu))的加入(ru)和主反(fan)應混合液(ye)(來(lai)自試劑準(zhun)備區)制備成(cheng)反應(ying)混合液等(deng)也可在本(ben)區(qu)內進行。本(ben)區(qu)主要設備有：擴(kuo)增儀、冰箱、離心機、加樣器等(deng)。

本區的(de)壓(ya)力梯度(du)要求(qiu)為：相對于鄰(lin)近區域為負壓(ya)，以(yi)避免(mian)氣溶(rong)膠從本區漏出。

4、擴增(zeng)產物分析區：擴增(zeng)產物的(de)測定。本區主要設備有酶標儀、洗板機、加樣器和(he)水浴(yu)箱等。

本區(qu)的壓力梯度的要求(qiu)為(wei)：相(xiang)對于鄰近(jin)區(qu)域為(wei)負壓，以避免擴增產物從本區(qu)擴散至其它區(qu)域。

三、PCR實驗室通風系統及壓力控制

各區(qu)域之(zhi)間(jian)應(ying)具備單向(xiang)的(de)(de)實(shi)(shi)驗工藝流(liu)(liu)、物流(liu)(liu)、人流(liu)(liu)與氣流(liu)(liu)，形成單向(xiang)流(liu)(liu)程的(de)(de)保護屏障(zhang)，避免實(shi)(shi)驗之(zhi)間(jian)的(de)(de)相互干擾，防止氣溶膠(jiao)擴散對(dui)實(shi)(shi)驗過程造成污染。

PCR實(shi)驗(yan)室并沒有(you)嚴格的(de)凈化要求，但是(shi)為避免(mian)各個實(shi)驗(yan)區(qu)域交叉污染的(de)可能性，宜(yi)采用全(quan)送全(quan)排(pai)的(de)氣(qi)流組織形式(shi)，嚴格控制送、排(pai)風(feng)的(de)比例(li)以保證各實(shi)驗(yan)區(qu)的(de)壓(ya)力要求。

四、PCR實驗室裝飾

實驗(yan)室(shi)圍護結構應(ying)牢固、氣密性好；所有陰陽(yang)角宜采用圓(yuan)弧(hu)過渡；墻體內壁光(guang)潔、不積塵(chen)、耐腐蝕、易清洗消(xiao)毒；地面使用PVC卷材或環氧樹脂自流坪(ping)，材料應滿足無(wu)縫隙、無(wu)滲漏(lou)、光(guang)潔(jie)、耐(nai)腐蝕(shi)的要求。

五、PCR實驗室注意事項

1、幾個區(qu)(qu)域的(de)大小設置(zhi)情(qing)況(kuang)，試(shi)劑(ji)準備區(qu)(qu)、擴增(zeng)區(qu)(qu)、擴增(zeng)產物(wu)分析區(qu)(qu)，空間可(ke)以相對小一(yi)些，樣品制備區(qu)(qu)要放(fang)置(zhi)生物(wu)安全柜和低溫冰箱(xiang)，空間應大一(yi)些。

2、試(shi)劑(ji)準備(bei)區、樣品(pin)制(zhi)備(bei)區設緊急洗眼器，以保(bao)證操(cao)作(zuo)人員(yuan)的(de)安全。