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來源：蘇州邁萊柏系統工程有限公司發布時間2021.09.16
無菌操作區
無(wu)菌操(cao)作(zuo)區是只限(xian)于(yu)(yu)細胞培(pei)養及其(qi)他無(wu)菌操(cao)作(zuo)的區域(yu)，最好(hao)能與外界(jie)隔離，不能穿行或受其(qi)他干擾。在一般環境的空(kong)氣(qi)中，由于(yu)(yu)存在許多塵埃和雜菌，較易造(zao)成污染。
因此，接(jie)種工作(zuo)要在空氣經過滅菌(jun)的環境里進(jin)行，小規(gui)模(mo)的無菌(jun)環境可利(li)用超凈工作(zuo)臺(tai)創造，大規(gui)模(mo)的需建無菌(jun)室。
理想的(de)無菌(jun)操作室應(ying)劃為三部分(fen)∶
1、更(geng)衣室(shi)：供更(geng)換衣服、鞋子及穿(chuan)戴帽子和口罩。
2、緩(huan)沖(chong)間(jian)：位于(yu)更衣間(jian)與(yu)操作間(jian)之間(jian)，用于(yu)準備工作，還有(you)防(fang)止污(wu)染的(de)作用，以保證(zheng)操作間(jian)的(de)無菌環境(jing)，同時可放置恒溫培養箱以及必需的(de)小(xiao)型(xing)儀器(qi)。
3、無(wu)(wu)(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)(zuo)間：無(wu)(wu)(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)(zuo)間則專用(yong)(yong)于(yu)無(wu)(wu)(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)(zuo)、細胞培養，其大小(xiao)(xiao)要適(shi)當，且其頂部不宜(yi)過高以保證紫外(wai)線(xian)的滅菌(jun)效(xiao)果﹔墻壁光滑無(wu)(wu)(wu)死角以便清洗和消(xiao)毒(du)(du)(du)，無(wu)(wu)(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)(zuo)間容積(ji)小(xiao)(xiao)且為密閉式(shi)，一(yi)般無(wu)(wu)(wu)菌(jun)操(cao)作(zuo)(zuo)間的空氣消(xiao)毒(du)(du)(du)用(yong)(yong)紫外(wai)線(xian)燈(deng)，有的實驗室使用(yong)(yong)無(wu)(wu)(wu)臭氧(yang)紫外(wai)線(xian)消(xiao)毒(du)(du)(du)器或電子消(xiao)毒(du)(du)(du)滅菌(jun)器。
凈化(hua)工作(zuo)臺∶操作(zuo)簡(jian)單，安裝方便，占用空間小且凈化(hua)效果很(hen)好。一(yi)般(ban)細菌培養室使用的凈化(hua)工作(zuo)臺主要有兩種：（a）側流式或(huo)稱(cheng)垂直式（b）外(wai)流式或(huo)稱(cheng)水平層流式。
孵育區
孵(fu)育(yu)區(qu)(qu)也(ye)稱(cheng)培養區(qu)(qu)，本區(qu)(qu)對無(wu)(wu)菌(jun)的要求雖不比無(wu)(wu)菌(jun)區(qu)(qu)嚴格，但(dan)仍需清潔無(wu)(wu)塵，因此也(ye)應設置(zhi)在干擾少(shao)而非來往穿行(xing)的區(qu)(qu)域。孵(fu)育(yu)可在孵(fu)箱(xiang)或(huo)可控制溫(wen)度的溫(wen)室(shi)中進行(xing)，后(hou)者費用高，一般實驗(yan)室(shi)多采用孵(fu)箱(xiang)進行(xing)工作。
制備區
制(zhi)備(bei)區主要(yao)進行(xing)培養(yang)(yang)液及有關培養(yang)(yang)用的液體等(deng)的制(zhi)備(bei)。應設(she)有試(shi)劑柜、器(qi)械柜、實驗臺和上水道、電源等(deng)，配備(bei)的主要(yao)儀器(qi)設(she)備(bei)有水純化裝置、天平、微波爐(lu)、pH計、抽氣(qi)泵、電爐(lu)、培養(yang)(yang)分裝器(qi)、各(ge)種(zhong)規格的培養(yang)(yang)瓶、培養(yang)(yang)皿、移液管、燒(shao)杯(bei)、量筒、容量瓶等(deng)。
在有天平、pH計、磁力拌器(qi)等設備下完成(cheng)制(zhi)備以后，應在無(wu)菌操(cao)作(zuo)臺進行過濾除(chu)菌。液體制(zhi)備直(zhi)接關(guan)系(xi)組織細胞養(yang)的(de)成(cheng)敗，因此必須嚴格無(wu)菌操(cao)作(zuo)。
儲藏區主要存(cun)放(fang)各類(lei)冰箱、干(gan)燥箱、液(ye)(ye)氫罐、無菌培養(yang)液(ye)(ye)、培養(yang)瓶等，此環境也需要清潔無塵。為(wei)了(le)保(bao)存(cun)細胞(bao)(bao)，特別是不易獲得的(de)突變型細胞(bao)(bao)或(huo)細胞(bao)(bao)株，要將(jiang)細胞(bao)(bao)凍(dong)存(cun)。凍(dong)存(cun)的(de)溫度(du)一般為(wei)液(ye)(ye)氫溫度(du)-196℃。
細(xi)胞的凍存過程需要一系列程序降溫(wen)，一般為4℃下存放30min。轉(zhuan)放-20 ℃ 1 h，再轉(zhuan)入-80~-70℃過夜，之后才可以轉(zhuan)移(yi)到(dao)液(ye)氫(qing)內(-196℃)。因此儲存區(qu)必須配(pei)備冰箱(xiang)、低(di)溫(wen)冰箱(xiang)、超低(di)溫(wen)冰箱(xiang)和液(ye)氫(qing)罐等設備。
清潔和消毒滅菌區
清潔和消(xiao)毒滅菌區應(ying)與(yu)其他(ta)區域分開，主要(yao)進行所有細胞培養器皿的清洗、準備、消(xiao)毒及三(san)蒸(zheng)水制備等工(gong)作，應(ying)備有高(gao)壓蒸(zheng)汽滅菌鍋(guo)、細菌過濾設(she)備、電熱干燥箱、消(xiao)毒柜(ju)、排風設(she)備等。
細胞實(shi)驗室的建設要求
環(huan)境要求(qiu)
溫度：儀器(qi)還是操作對(dui)溫度(du)沒有特殊要求，維持舒適(shi)的溫度(du)即可，比(bi)如18~26度(du)。
濕度：過高的濕度會導(dao)致(zhi)微(wei)生(sheng)物的滋(zi)生(sheng)，所以建(jian)議正常維持濕度在70%以下(xia)。
潔凈(jing)度(du)：細胞實驗對(dui)潔(jie)(jie)凈(jing)(jing)區并沒有(you)要(yao)求(qiu)(qiu)，細胞實驗里(li)面只(zhi)有(you)細胞操(cao)作的(de)時候要(yao)求(qiu)(qiu)無菌(jun)的(de)環(huan)境，這時要(yao)求(qiu)(qiu)有(you)局(ju)部的(de)百(bai)級(ji)，通常可(ke)以利用超(chao)凈(jing)(jing)臺或者生物安全(quan)柜來實現，不過(guo)有(you)時候為(wei)了有(you)個(ge)更(geng)(geng)好一點的(de)環(huan)境，減小超(chao)凈(jing)(jing)臺過(guo)濾(lv)器更(geng)(geng)換(huan)的(de)時間(jian)，會維持室內的(de)潔(jie)(jie)凈(jing)(jing)度(du)，比如萬級(ji)的(de)潔(jie)(jie)凈(jing)(jing)度(du)。
無(wu)菌(jun)無(wu)毒的操作環(huan)境(jing)和培(pei)養(yang)環(huan)境(jing)是(shi)保(bao)證細(xi)胞在體外培(pei)養(yang)成功的首要(yao)條件(jian)。細(xi)胞培(pei)養(yang)對無(wu)菌(jun)環(huan)境(jing)要(yao)求很高，在細(xi)胞操作時，一般需要(yao)在100級空(kong)氣質(zhi)量條件(jian)下進行。
在體外(wai)培(pei)養(yang)的細胞由于缺乏對微生物(wu)和(he)有毒(du)物(wu)的防御能力，一旦被微生物(wu)或(huo)有毒(du)物(wu)質(zhi)污染，或(huo)者自(zi)身代謝物(wu)質(zhi)積累，可導致細胞中毒(du)死(si)亡。
照明︰滿足實驗用的(de)操作照(zhao)度(du)，通常在300LUX。
維護結構要求
雖(sui)然(ran)實驗(yan)的(de)操作對大環境(jing)沒(mei)有特殊要求，不過最好能(neng)有不產塵(chen)、不積塵(chen)的(de)環境(jing)，能(neng)保(bao)證室內的(de)清潔(jie)，并且易(yi)于清洗、不容易(yi)滋(zi)生微生物，所(suo)以在選擇維護結(jie)構時(shi)，選用彩鋼板(ban)、醫療板(ban)等潔(jie)凈板(ban)材是比較好的(de)選擇，為(wei)了保(bao)證室內的(de)通透性，可(ke)以布置密(mi)閉窗(chuang)。
消毒
通常做完實驗后(hou)，都需(xu)要做終(zhong)末(mo)消毒(du)，室內需(xu)要安(an)裝紫外燈，利用紫外燈對空氣和表面消毒(du)。
細胞實驗(yan)室建設的注意(yi)事項
1、放(fang)置細胞培養的實驗室(shi)，空調需要能保證(zheng)在冬季(ji)能制冷，特別是在密(mi)閉(bi)的環境里，培養箱(xiang)等設備的散(san)熱量(liang)會比較大，導致室(shi)內溫度過高(gao)。
2、如(ru)果(guo)設計成凈化實(shi)驗(yan)(yan)室，就需要(yao)按凈化實(shi)驗(yan)(yan)室的要(yao)求去做，如(ru)果(guo)做的細胞涉及到生物(wu)安全(quan)，則必(bi)須按照(zhao)生物(wu)安全(quan)實(shi)驗(yan)(yan)室去設計，具(ju)體根據所(suo)做實(shi)驗(yan)(yan)的種類，來確定實(shi)驗(yan)(yan)室的設計要(yao)求以及選擇(ze)的設備，是(shi)選擇(ze)超凈工作臺還(huan)是(shi)生物(wu)安全(quan)柜。
3、從(cong)事臨床(chuang)細胞治(zhi)療的，需要(yao)按(an)照具(ju)體的規范要(yao)求建設。
